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工业恒温机发展起来的一种放大信号和靶核酸相结合的检测方法

时间:2022-06-29 10:59:39 作者:恒温恒湿机 点击:

工业恒温机依赖核酸序列的扩增技术 (NASBA)是在PCR基础上发展起来的一种新技术,是由1对带有T7启动子序列的引物引导的连续、等温、基于酶反应的核酸扩增技术,反应在41℃进行,可以在2h左右将模板RNA扩增约109倍,比常规PCR法高1000倍,不需特殊的仪器。

该技术一出现就被用于疾病的快速诊断和病人血清中HIV-1的定量检测。尽管RNA的扩增也可以使用反转录PCR技术(通过反转录形成单链DNA模板),NASBA相比则有自己的优势:可以在相对恒温的条件下进行(一般恒温为41摄氏度)。,工业恒温机该技术用于医学诊断,相对传统的PCR技术更为稳定,准确。

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NASBA的优势:

1)它的引物上带有T7启动子序列,而外来双链DNAT7启动子序列,不可能被扩增,因此该技术具有较高的特异性和灵敏度。

2NASBA将反转录过程直接合并到扩增反应中,缩短了反应时间。

NASBA的劣势:

1)反应成分比较复杂

2)需要3种酶使得反应成本较高

3)对DNA病毒的检测上NASBA就显得不是那么适合

1998 年建立的滚环扩增 (RCA) 是模拟自然界微生物环状 DNA 的滚环复制过程,,工业恒温机发展起来的一种放大信号和靶核酸相结合的检测方法。在具有链置换活性的 DNA 聚合酶作用下由一条引物与环形 DNA 模板的链置换合成,实现环状 DNA 模板的体外等温线性扩增。可分为线性扩增 (单引物 RCA)、指数扩增、多引物扩增和信号扩增RCA

     工业恒温机这种方法不仅可以直接扩增DNARNA,还可以实现对靶核酸的信号放大,灵敏度达到一个拷贝的核酸分子,因此在核酸检测中具有很大的应用价值和潜力。

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